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http://repositorioinstitucional.uea.edu.br//handle/riuea/2364Registro completo de metadados
| Campo DC | Valor | Idioma |
|---|---|---|
| dc.contributor.author | Souza, Ketlen Christine Nunes de | - |
| dc.date.available | 2020-03-17 | - |
| dc.date.available | 2020-03-17T19:31:00Z | - |
| dc.date.issued | 2011-07-29 | - |
| dc.identifier.uri | http://repositorioinstitucional.uea.edu.br//handle/riuea/2364 | - |
| dc.description.abstract | The Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi Root, 1926 is considered the primary vector of malaria and the species has the sharpest endophagous and anthropophily between the South American anopheline, with the biggest records in the Amazon region. Malaria is a parasitic disease that affects more than 90 countries worldwide, where about 40% of the population live in areas at risk because they are difficult to control. In recent years, studies of alternative detection and quantification of expression gene have been carried out, as the amplification and analysis of cDNA fragments by the method of Polymerase Chain Reaction in Real Time (qRTPCR), one of the technologies employed in post-genomic age. In this sense, validated the level of genes expression sampled in silico, in advance, between two stages of development of An.darlingi (larvae and adults). An. darlingi samples were obtained in the neighborhood Puraquequara (03º 03' 06.95'' S and 59º 52' 31.38'' W), of Manaus City, Amazonas State, identified and treated individually for oviposition. Larvae of the 1st or 2nd instar were used for total RNA extraction with the Extraction and Purification Quiagen® Kit. We obtained the complementary strand of mRNA (cDNA) with the kit from Promega® . The qRT-PCR method was according to the system SYBR® Green (Applied Biosystems® ) with reactions performed in the ABI-7500 thermocycler™ Real-Time PCR System, Applied Biosystems® . Was analyzed for gene expression, four genes of interest: Actin, Trypsin, Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and Phosrestin II (Arrestin-A). Among these, GAPDH showed little variation in their level of gene expression in larvae and adults. Therefore, this gene was chosen as reference. Larvae (L1L2) were chosen as normalizing the amplification reactions. In relative quantification, the actin expression was higher in adult compared with larvae, validating the results normalized level of expression in silico library of ESTs from An. darlingi. Trypsin was mainly expressed in larvae. In A. darling the Phosrestin II - (Arrestin-A) expression was higher in larvae than in adults. These data validate the differential gene expression between L1L2 and adults of An. darlingi, useful for understanding the biology and evolution gene of this important malaria vector in South America. | pt_BR |
| dc.language | por | pt_BR |
| dc.publisher | Universidade do Estado do Amazonas | pt_BR |
| dc.rights | Acesso Aberto | pt_BR |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ | * |
| dc.subject | Anopheles darlingi | pt_BR |
| dc.subject | Expressão gênica | pt_BR |
| dc.subject | QqRT-PCR | pt_BR |
| dc.subject | Malária | pt_BR |
| dc.title | Validação do nível de expressão gênica diferencial dos genes actina, tripsina e phosrrestin ii entre larvas e adultos de anopheles darlingi root, 1926 (diptera: culicidae) | pt_BR |
| dc.title.alternative | Validation of the level of differential gene expression of the actin, trypsin and phosrrestin ii genes among larvae and adults of anopheles darlingi root, 1926 (diptera: culicidae) | pt_BR |
| dc.type | Dissertação | pt_BR |
| dc.date.accessioned | 2020-03-17T19:31:00Z | - |
| dc.contributor.advisor-co1 | Rafael, Míriam Silva | - |
| dc.contributor.advisor1 | Tadei, Wanderli Pedro | - |
| dc.contributor.referee1 | Carvalho-Zilse, Gislene Almeida | - |
| dc.contributor.referee2 | Lozano, Jorge Luis López | - |
| dc.contributor.referee3 | Rafael, Míriam Silva | - |
| dc.description.resumo | O Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi Root, 1926 é o vetor primário da malária que apresenta a mais acentuada antropofilia e endofagia entre os anofelinos sul americanos, com os maiores registros de casos da doença na Amazônia. A malária é uma parasitose que afeta mais de 90 países no mundo, onde cerca de 40% da população vivem em áreas de risco, pois há dificuldades para o seu controle. Nos últimos anos, estudos alternativos de detecção e quantificação da expressão gênica têm sido realizados, como a amplificação e análise de fragmentos de cDNA, pelo método de Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (qRTPCR), uma das tecnologias mais empregadas na era pós-genômica. Nesse sentido, validou-se o nível de expressão de genes amostrados in silico, previamente, entre dois estágios de desenvolvimento de An. darlingi (larvas e adultos). Amostras de An. darlingi foram obtidas no Bairro Puraquequara (S 03º 03’ 06.95’’ e W 59º 52’ 31.38’’), Município de Manaus, Estado do Amazonas, identificadas e tratadas de forma individual para oviposição. Larvas de 1o e 2o estádios foram utilizadas para extração de RNA total com o Kit de extração e purificação Quiagen® . Obteve-se a fita complementar de RNAm (cDNA), com o Kit da Promega® . O método da qRT-PCR foi segundo o sistema SYBR® Green (Applied Biosystems® ) e as reações de amplificações do cDNA realizadas no termociclador ABI-7500™ Real-Time PCR System, Applied Biosystems® . Analisaram-se por expressão gênica quatro genes de interesse: Actina, Tripsina, Gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH) e Phosrestin II (Arrestin-A). Dentre estes, GAPDH mostrou pouca variação no nível de expressão gênica em larvas e adultos. Portanto, este foi escolhido como gene de referência. As larvas (L1L2) foram escolhidas como normalizadoras das reações de amplificações. Na quantificação relativa, a Actina foi mais expressa em adulto comparativamente com larvas, o que valida os resultados normalizados de nível de expressão in silico da biblioteca de ESTs de An. darlingi. Tripsina foi expressa principalmente em larvas. Em An. darlingi a Phosrestin II (Arrestin-A) foi mais expressa em larvas do que em adultos. Estes dados validaram a expressão gênica diferencial entre L1L2 e adultos de An. darlingi, útil para entender a biologia e evolução gênica desse importante vetor da malária da América do Sul. | pt_BR |
| dc.publisher.country | Brasil | pt_BR |
| dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Recursos Naturais da Amazônia | pt_BR |
| dc.relation.references | ADAMS, M.D.; KELLEY, J.M.; GOCAYNE, J.D.; DUBNICK, M.; POLYMEROPOULOS, M.H.; XIAO, H.; MERRIL, C.R.; WU, A.; OLDE, B.; MORENO, R.; KERLAVAGE, A.R.; MCCOMBIE, W.R.;VENTER,J.C. Complementary DNA sequencing: “expressed sequence tags” and the human genome project. Science, n. 252, p. 1651-1656, 1991. ARRUDA, M.; CARVALHO, M.B.;NUSSENZWEIG, R.S.; MARACIC, M.; FERREIRA, A.W.; COCHRANE, A.H. Potential vectors of malaria and their different susceptibility to Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax in Northern Brazil identified by immunoassay. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. n. 35, v. 5, p. 873-881, 1986. AZEVEDO-JUNIOR, G.M. Anotação do transcriptoma parcial de Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi Root, 1926. [s.n.], 201. xi, 66. Dissertação (mestrado)- INPA, Manaus, 2011. CDD 19. ed. 595.770415. BASIC LOCAL ALIGNMENT SEARCH TOOL – Blastx. http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Acesso em 10/02/2006. BASSET, JR.D.E.; BOGUSKI, M.S; HEITER, P. 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| dc.subject.cnpq | Entomologia | pt_BR |
| dc.publisher.initials | UEA | pt_BR |
| Aparece nas coleções: | DISSERTAÇÃO - MBT Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Recursos Naturais da Amazônia | |
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| Validação do nível de expressão gênica diferencial dos genes actina, tripsina e phosrrestin ii entre larvas e adultos de anopheles darlingi root, 1926 (diptera culicidae).pdf | 1,44 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |
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